蛋白質印記（Western Blot）又稱免疫印跡（immunoblotting），是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，并且通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術，常用于鑒定蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。
　　
　　技術優(yōu)勢
　　
　　高分辨率的電泳技術：聚丙烯酰胺凝膠（polyacrylamidegel，PAGE）把分子篩作用和電荷效應結合在同一方法中，達到更高的靈敏度。
　　
　　特異敏感的抗原-抗體反應：抗原抗體的結合實質上是抗原表位與抗體超變區(qū)中抗原結合點之間的結合。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系，所以抗原與抗體的結合具有高度的特異性。
　　
　　1-5ng中等大小的靶蛋白：可檢測到低至1～5ng（低可到10～100pg）中等大小的靶蛋白。
　　
　　Western Blot實驗注意事項
　　
　　1、把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維膜上；
　　
　　a.轉移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡
　　
　　b.在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙（預先用轉移緩沖液浸濕），將凝膠夾在中間，保持濕潤和沒有氣泡
　　
　　c.將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠家建議方法放入電泳裝置中，凝膠面向陰極
　　
　　d.將上述裝置放入緩沖液槽中，并灌滿轉移緩沖液以淹沒凝膠
　　
　　e.按照廠家所示接通電源開始電泳轉移
　　
　　f.轉移結束后，取出薄膜和凝膠，棄去凝膠
　　
　　2、將薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量標準顯現(xiàn)時取出，記錄下標準位置；
　　
　　3、用100ml水洗滌纖維素膜，必要時可用脫色緩沖液；
　　
　　4、膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時；
　　
　　5、室溫下，用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜
　　
　　6、用封口機將薄膜封入塑料袋中，盡可能不留空氣；
　　
　　7、袋的一角剪一緩沖液的小口，用透析袋夾緊；
　　
　　8、混合：NGS(100微升)，印跡緩沖液中的抗體（2.5-5毫升），加在裝薄膜的袋中，于室溫下?lián)u動2小時（或4℃過夜）；
　　
　　9、用總體積300mlPBS-Tween緩沖液，分4次在一淺盤中洗滌薄膜，每次75ml；
　　
　　10、將連接生物素的羊抗兔IgG（40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升NGS）加在袋內(nèi)，于室溫下?lián)u動1小時；
　　
　　11、按步驟9洗滌；
　　
　　12、加入抗生素蛋白-HRP（40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升NGS），于室溫下?lián)u動；
　　
　　13、Western Blot中轉移在膜上的蛋白處于變性狀態(tài)，空間結構改變，因此那些識別空間表位的抗體不能用于Western Blot檢測。這種情況可以將表達目的蛋白的細胞或細胞裂解液中的所有蛋白先生物素化，再用酶標記親和素進行Western Blot。實驗中取膠和膜需帶手套。