技術服務Article
常用免疫組織化學方法原理
更新時間:2015-11-19 點擊次數(shù):1412次
免疫組化,是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
這些常用免疫組織化學方法的原理如下:
1.免疫熒光細胞化學技術
將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
2.免疫酶細胞化學技術
是目前免疫組織化學研究中zui常用的技術.基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究.
3.免疫膠體金技術
就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究.