細(xì)胞劃痕
服務(wù)原理 :
腫瘤細(xì)胞在體外仍具有遷移的能力。細(xì)胞劃痕法是測定了腫瘤細(xì)胞的運動特性的方法之一。其借鑒體外細(xì)胞致傷愈合實驗?zāi)P?,在體外培養(yǎng)的單層細(xì)胞上,劃痕致傷,然后比較不同實驗組中腫瘤細(xì)胞遷移的能力。
服務(wù)流程:
1.細(xì)胞培養(yǎng);
2.;
3.無血清/低血清培養(yǎng);
4.顯微鏡觀察拍照;
5.計算遷移率。
實驗步驟 :
實驗共分以下4個主要步驟:
1. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞:
準(zhǔn)備A549細(xì)胞,轉(zhuǎn)染前一天按照70-80%密度鋪在6cm培養(yǎng)皿中。16h后,按照轉(zhuǎn)染試劑說明書轉(zhuǎn)染細(xì)胞(8μg質(zhì)粒,20μL lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑) 。轉(zhuǎn)染24h后,重新鋪盤,密度為30-40%。
2. 劃線;
待細(xì)胞*貼壁后,用200μL tip輕輕劃線,垂直90度,用力均勻,確保劃線處無細(xì)胞。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)及拍照;
每隔3天換一次新鮮培養(yǎng)基。連續(xù)幾天倒置顯微鏡下100X下拍照,記錄細(xì)胞的遷移情況,直到細(xì)胞填滿劃痕處。
4. 統(tǒng)計分析。
劃線兩側(cè)間距為average gaps(AGs),使用Image-Pro Plus軟件分析各組細(xì)胞的AGs。
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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